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AMPPD發光顯色試劑盒

簡介 ：

AMPPD是堿性磷酸酶的化學發光底物 ，在適宜的緩衝液中 ，隨著酶的催化水解作用 ，AMPPD分解成AMP-D ，後者發出強度很高的光信號 ，其發光的速度取決於堿磷酶的濃度 。當堿磷酶偶合到雜交的探針時 ，便可以通過此係統檢測到雜交分子的存在量 。乙醇胺可使光信號輸出更理想 。AMPPD為1 ，2-二氧環已烷衍生物 ，它是一種生物化學領域中最新的超靈敏的堿性磷酸酶底物 ，其特點 ：反應速度快 ，在很短時間內提供正確可靠的結果 。在它的分子結構中有兩個重要部分 ，一個是聯接苯環和金剛烷的二氧四節環 ，它可以斷裂並發射光子 ；另一個是磷酸根基團 ，它維持著整個分子結構的穩定 。在通常情況下 ，這種化合物很穩定 。但是 ，結果有堿性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphate作為酶的底物會在酶的催化一脫去磷酸根基團 ，形成一個不穩定的中間體 。這個中間體隨即自行分解（二氧四節環斷裂） ，同時發射光子 。 AMPPD發光顯色試劑盒適用於PVDF膜 ，不推薦用於硝酸纖維素膜 。

組成 ：

自備材料 ：

1 、轉印了蛋白並已以抗體-酶複合物檢測過的PVDF膜

2 、Tris鹽緩衝液(TBS)

3 、透明的塑料保鮮膜

4 、蒸餾水

操作步驟(僅供參考) ：

臨用前 ，取適量的A1和A2 ，混合後獲得Dioxetane Buffer 。

按AMPPD溶於Dioxetane Buffer, 配製AMPPD底物溶液即為AMPPD Dioxetane Buffer(發色發光顯跡液) ，用於膜的染色 。

取適量Dioxetane Buffer洗膜 。

對於PVDF膜進行的堿性磷酸酶反應, 膜置於新鮮配製的AMPPD Dioxetane Buffer 作用 。

將膜移入適量的AMPPD Dioxetane Buffer中 ，浸泡(AP反應) 。

取出PVDF膜 ，滴幹水分 ，將膜正麵朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上 ，向後折疊將膜包裹起來 ，成為不漏水的封閉體 。

在暗房中 ，將膜正麵朝下放在感光膠片上 ，曝光數秒至數小時 。

如需要 ，在室溫下以適量的TBS洗膜 。

將膜放入AMPPD Dioxetane Buffer 。

10 、用蒸餾水洗膜 ，終止反應 。晾幹後拍照留永久的記錄 。

注意事項 ：

PVDF膜置於膠片上後 ，不要改變位置 。

曝光時間應根據實驗情況 ，自行摸索 。

配製好的AMPPD Dioxetane Buffer ，應避光低溫保存 。

為了您的安全和健康 ，請穿實驗服並戴一次性手套操作 。

有效期： 12個月有效 。

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